Testeur de mycotoxines ELISA Longueur d'onde 400 - 999 nm Détection d'aflatoxine B1 ST-2000A

ST-2000A Testeur de mycotoxines

L'analyseur de mycotoxines ST-2000A est un instrument analytique nécessaire pour l'aflatoxine et le dosage immuno-enzymatique. Le principe du dosage immuno-enzymatique en phase solide (ELISA), à savoir le dosage immuno-enzymatique (ELISA), est composé de cet instrument et du kit B1, qui peut être utilisé pour déterminer la teneur en aflatoxine B1 et autres mycotoxines dans les échantillons de manière limitée et quantitative (si équipé d'autres kits, d'autres toxines peuvent être détectées). Il est largement utilisé dans la détection de l'aflatoxine B1 et d'autres mycotoxines dans les aliments, les aliments pour animaux, les huiles, les produits laitiers, les médicaments, les boissons, le vin et autres produits.

Caractéristiques de performance :

1. Fonctionnement de l'affichage : écran LCD couleur, tableau de distribution de vidéophone, affichage des informations de la plaque entière, fonctionnement de l'écran tactile

2. Fonction de plaque vibrante : vitesse de plaque vibrante de niveau 3, temps réglable de 0 à 255 secondes

3. Station de travail : logiciel professionnel de marquage enzymatique, qui peut stocker 500 groupes de programmes, 100 000 résultats d'échantillons, et fournir des modes de calcul riches tels que l'absorbance, l'équation linéaire, l'équation logarithmique, l'équation quadratique, l'équation cubique, l'équation logarithmique absorbance-pourcentage-concentration, la fonction spline, le taux d'inhibition, etc.

Paramètres techniques :

1 Principe et application

Ce kit utilise la méthode ELISA compétitive indirecte pour détecter l'aflatoxine B1 (AFB1) dans les céréales, les aliments pour animaux et autres échantillons. Le kit est composé d'une plaque marquée aux enzymes pré-revêtue d'antigène de couplage, d'un marqueur enzymatique de horseradish, d'anticorps, de standards et d'autres réactifs correspondants. Pendant le test, ajoutez la solution standard ou échantillon, l'aflatoxine B1 dans l'échantillon et la plaque enzymatique pré-revêtue d'antigène conjugué entrent en compétition pour l'anticorps anti-aflatoxine B1. Après ajout du marqueur enzymatique, utilisez le substrat TMB pour développer la couleur. La valeur d'absorbance de l'échantillon est négativement corrélée à la teneur en aflatoxine B1 contenue dans l'échantillon. La quantité résiduelle d'aflatoxine B1 dans l'échantillon peut être obtenue en comparant avec la courbe standard.

2 Indicateurs techniques

2.1 Sensibilité du kit : 0,03 ppb (ng/ml)

2.2 Mode de réaction : 25 ℃, 30 min ~ 15 min

2.3 Limite de détection inférieure :

Céréales...................................................... 0,15 ppb

Aliments composés.......................................... 0,3 ppb

Huile comestible, arachide.................................... 0,6 ppb

Sauce soja, blé et autres aliments.............................. 0,3 ppb

Bière.......................................... 0,3 ppb

Vin, sauce soja, vinaigre.................................... 0,15 ppb

2.4 Taux de réaction croisée :

Aflatoxine B1 100%

2.5 Taux de récupération des échantillons :

Céréales et aliments composés.............................. 85% ± 15%

Arachide.................................... 82 ± 15%

Huile comestible.................................... 85 ± 15%

Sauce soja, blé et autres aliments.............................. 83 ± 15%

Bière.................................... 84 ± 15%

Vin, sauce soja, vinaigre............ 87 ± 15%

3 Composition du kit

Plaque de marquage enzymatique.................................... 96 puits

Solution standard (bouchon noir) : 1 ml chacune

0 ppb, 0,03 ppb, 0,06 ppb, 0,12 ppb, 0,24 ppb, 0,48 ppb

Solution standard élevée : 100 ppb.............................. 1 ml

Marqueur enzymatique (bouchon rouge).............................. 5,5 ml

Solution de travail d'anticorps (bouchon bleu).............................. 5,5 ml

Solution substrat A (bouchon blanc).............................. 6 ml

Solution substrat B (bouchon noir).............................. 6 ml

Solution de terminaison (bouchon jaune).............................. 6 ml

Solution de lavage concentrée 20X (bouchon blanc)..................... 40 ml

Manuel d'instructions.....................1 copie

4 Équipement et réactifs requis

4.1 Appareils : testeur d'aflatoxine, imprimante, homogénéisateur, appareil de séchage à l'azote, agitateur, centrifugeuse, pipette graduée, balance (sensibilité 0,01 g)

4.2 Micropipette : monocanal 20 µl-200 µl, 100 µl-1000 µl, multicanal 300 µl

4.3 Réactif : méthanol, n-hexane, trichlorométhane ou dichlorométhane

5 Préparation de l'échantillon

5.1 Instructions avant le traitement de l'échantillon :

Les appareils expérimentaux doivent être propres et utiliser des embouts d'aspiration jetables pour éviter la contamination et les interférences avec les résultats expérimentaux.

5.2 Préparation de la solution :

Solution 1 : extrait d'échantillon

Méthanol à 70 %, c'est-à-dire V méthanol : V eau désionisée = 7:3.

5.3 Étapes de préparation de l'échantillon :

5.3.1 Méthode de traitement des céréales

1) Peser 2 g d'échantillon broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 5 ml de solution d'extraction d'échantillon, agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Prélever 0,5 ml de surnageant, ajouter 0,5 ml d'eau désionisée et bien mélanger ;

3) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 5 Limite de détection inférieure : 0,15 ppb

5.3.2 Méthodes de traitement des échantillons à forte absorption d'eau tels que le son de maïs et le son de blé

1) Peser 2 g d'échantillon broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 20 ml de solution d'extraction d'échantillon, agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Prélever 0,5 ml de surnageant, ajouter 0,5 ml d'eau désionisée et bien mélanger ; (Pour l'échantillon avec une teneur en toxines extrêmement élevée, il peut être dilué avec du méthanol à 35 % puis testé. Par exemple, prendre 0,1 ml de la solution mélangée dans 2) et 0,9 ml de méthanol à 35 % pour mélanger. Le ratio de dilution final de l'échantillon est de 200, et la limite de détection est de 6 ppb.)

3) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 20 Limite de détection inférieure : 0,6 ppb

Remarque : En raison de la distribution inégale des toxines dans l'échantillon, il est nécessaire de prélever des échantillons à plusieurs points et de les mélanger complètement avant de prendre 2 g pour le test.

5.3.3 Méthode de traitement des aliments composés

1) Peser 2 g d'échantillon broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 10 ml de solution d'extraction d'échantillon, agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Prélever 0,5 ml de surnageant, ajouter 0,5 ml d'eau désionisée et bien mélanger ;

3) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 10 Limite de détection inférieure : 0,3 ppb

5.3.4 Méthodes de traitement des aliments pour animaux, huile comestible, arachides et aliments riches en graisses

1) Peser 2 g d'échantillon broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 8 ml de n-hexane et 10 ml de solution d'extraction d'échantillon, agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Retirer le liquide supérieur, prendre 0,5 ml du liquide inférieur et ajouter 0,5 ml d'eau désionisée, bien mélanger, puis prendre 0,5 ml du liquide mélangé et ajouter 0,5 ml de méthanol à 35 %, agiter pendant 30 s ;

3) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 20 Limite de détection inférieure : 0,6 ppb

5.3.5 Aliments ou condiments tels que sauces, blé, biscuits, pâtisseries, et méthodes de traitement des aliments pour animaux tels que concentrés d'aliments pour animaux

1) Peser 2 g d'échantillon broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 10 ml de solution d'extraction d'échantillon, agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Prélever 2 ml de surnageant, ajouter 4 ml de trichlorométhane (ou de dichlorométhane), agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

3) Transférer le liquide supérieur dans un autre récipient, laisser le liquide inférieur en attente, ajouter 4 ml de chloroforme (ou de dichlorométhane) supplémentaire au liquide supérieur, agiter et mélanger complètement pendant 5 minutes, et la température ambiante est de 4000 tr/min/séparation centrale pendant 10 minutes ;

4) Retirer le liquide supérieur, combiner les deux liquides inférieurs et mélanger complètement ;

5) Prélever 2 ml du liquide inférieur combiné et le sécher sous azote à 50-60 ℃ ;

6) Ajouter 0,5 ml d'extrait d'échantillon pour dissoudre complètement la substance séchée, puis ajouter 0,5 ml d'eau désionisée et mélanger ;

7) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 10 Limite de détection inférieure : 0,3 ppb

5.3.6 Méthode de traitement de la bière

1) Bien mélanger la bière (éliminer le CO2), prélever 2 ml d'échantillon de bière, ajouter 1 ml d'eau distillée, ajouter 7 ml de méthanol et agiter pendant 5 minutes ;

2) Prélever 0,5 ml de solution d'échantillon mélangée et ajouter 0,5 ml d'eau désionisée pour bien mélanger ;

3) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 10 Limite de détection inférieure : 0,3 ppb

5.3.7 Méthode de traitement du vin, de la sauce soja et du vinaigre

1) Prélever 2 ml d'échantillon, ajouter 2 ml d'eau distillée, ajouter 10 ml de trichlorométhane (ou de dichlorométhane), agiter pendant 5 minutes, 4000 tr/min à température ambiante/10 minutes de séparation centrale ;

2) Prélever 1 ml du liquide inférieur et le sécher sous azote à 50-60 ℃ ;

3) Ajouter 0,5 ml d'extrait d'échantillon pour dissoudre complètement la substance séchée, puis ajouter 0,5 ml d'eau désionisée et bien mélanger ;

5) Prélever 50 µl pour analyse.

Ratio de dilution de l'échantillon : 5 Limite de détection inférieure : 0,15 ppb

6 Étapes de l'ELISA

Sortir le réactif requis de l'environnement de stockage à froid de 4 ℃ et le placer à température ambiante pendant plus de 30 minutes. Il peut y avoir des cristaux qui doivent être ramenés à température ambiante pour se dissoudre complètement lorsque la solution de lavage est stockée au froid. Chaque réactif liquide doit être agité avant utilisation. Sortir le nombre requis de plaques microporeuses et de cadres, placer les plaques microporeuses inutilisées dans des sacs auto-scellants et les stocker à 2-8 ℃.

Avant l'expérience, la solution de lavage concentrée 20X est diluée 20 fois en solution de lavage de travail.

6.1 Numérotation : numéroter les puits correspondants de l'échantillon et du standard en séquence, faire deux puits parallèles pour chaque échantillon et standard, et enregistrer la position du puits standard et du puits échantillon.

6.2 Réaction d'ajout d'échantillon : ajouter 50 µl/puits de standard ou d'échantillon dans leurs puits respectifs, puis ajouter 50 µl/puits de marqueur enzymatique, puis ajouter 50 µl/puits de solution de travail d'anticorps, sceller la plaque avec une membrane de couverture, agiter doucement pendant 5 secondes, mélanger, et incuber à 25 ℃ pendant 30 minutes.

6.3 Lavage : retirer soigneusement la membrane de couverture, sécher le liquide dans le puits, laver complètement le puits avec la solution de lavage de travail à 250 µl/puits pendant 5 fois, avec un intervalle de 30 secondes, et sécher en tapotant avec du papier absorbant (les bulles qui ne sont pas éliminées après le tapotement peuvent être percées avec une tête de seringue propre).

6.4 Développement de couleur : ajouter 50 µl de solution substrat A et 50 µl de solution substrat B à chaque puits, agiter doucement pendant 5 secondes et bien mélanger, et développer la couleur dans l'obscurité à 25 ℃ pendant 15 minutes.

6.5 Terminaison : ajouter 50 µl de solution de terminaison à chaque puits, agiter doucement et bien mélanger pour arrêter la réaction.

6.6 Mesure de la valeur d'absorbance : utiliser le testeur d'aflatoxine pour mesurer la valeur d'absorbance de chaque puits à 450 nm (double longueur d'onde 450/630 nm recommandée). La détermination doit être terminée dans les 10 minutes suivant la fin de la réaction.

6.7 Le testeur automatique d'aflatoxine ST-2000A effectue automatiquement la détermination et produit automatiquement les résultats.