Méthode de mesure de l'aflatoxine du maïs
L'aflatoxine, abrégée en AFT en anglais, est un composé composé d'un anneau difuranyl et de coumarine (oxanaphthoquinone).,avec un poids moléculaire de 312-346 et un point de fusion de 200-300 °C. Il a des propriétés stables et résistantes aux températures élevées et peut produire de la fluorescence sous la lumière ultraviolette à longue onde.Il est divisé en B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM et alcools toxiques selon différentes couleurs de fluorescence, valeurs RF et structures.
L'AFT est insoluble dans l'eau, l'éthane, l'éther et l'éther de pétrole, mais facilement soluble dans des solvants organiques tels que le méthanol, l'éthanol, le chloroforme, l'acétonitrile et le diméthylformamide.L'AFT peut se décomposer légèrement dans des solvants acides d'un pH de 1 à 3, se décomposent rapidement et se décomposent dans des solutions au pH de 9 à 10, se décomposent rapidement lorsqu'elles sont exposées à l'alcali et se décomposent en sels presque non toxiques dans des solutions alcalines au pH de 9 à 10.Il peut être réduit dans des conditions acides..
Objectif de l'expérience
L'aflatoxine fait référence à certaines substances cancérogènes hautement toxiques produites par les champignons.symptômes fréquents de dysfonctionnement hépatique tels que fièvreL'exposition à long terme à de faibles doses (20 microgrammes/kg de poids corporel) peut augmenter considérablement le risque de cancer du foie, de cancer gastrique et d'autres maladies.Comme il est largement présent dans les cultures et les aliments et qu'il cause de graves dommages aux humains et aux animaux, l'établissement de méthodes de détection rapides et précises est d'une grande importance pour assurer la sécurité alimentaire et la santé publique.
Le but de cette expérience est d'utiliser le principe de l'analyse enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) en phase solide, à savoir l'analyse enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),pour limiter et quantifier la teneur en aflatoxine B1 dans les échantillons, fournissant une base scientifique pour l'évaluation des risques de contamination alimentaire.
Appareils expérimentaux
1 analyseur de mycotoxines ST-2000A
2 Maïs, homogénéisateur, dispositif de séchage de l'azote, oscillateur, centrifugeuse, pipette graduée, balance (sensibilité 0,01 g), micropipette, réactif de méthanol, n-hexane, chloroforme ou dichlorométhane
Procédure expérimentale
1 Vérifiez que l'équipement utilisé pour l'expérience est propre, sec et exempt de contamination.
2 Mélanger le méthanol et l'eau désionisée dans un rapport de 7:3 pour préparer la solution d'extraction de l'échantillon
3 Prenez 2 g d'échantillon de maïs broyé et placez-le dans un tube centrifugeur de 50 ml. Ajoutez 5 ml de solution d'extraction d'échantillon et agitez pendant 5 minutes à température ambiante de 4000 tr/min pendant 10 minutes.prendre 0.5 ml de supernatant et ajouter 0.5 ml d'eau désionisée.
4 Retirer les réactifs requis de l'environnement réfrigéré à 4 °C, les laisser équilibrer à température ambiante pendant 30 minutes et bien agiter.et diluer 20 fois la solution de lavage concentrée avec de l'eau désionisée pour obtenir la solution de lavage de travail.
5 Numéroter les micropores correspondants de l'échantillon et de l'échantillon-type en séquence, réaliser 2 puits parallèles pour chaque échantillon et pour chaque échantillon-type, et consigner la position des puits-type et des puits-échantillons.Ajouter 50 μl/puits d'échantillon standard ou d'échantillon à leurs micropores respectifs, puis ajouter 50 μl/puits de marqueur enzymatique, puis ajouter 50 μl/puits de solution de travail d'anticorps.Réagir à 25 °C pendant 30 minutes.
Retirer le film de couverture, secouer le liquide à l'intérieur du trou et le laver soigneusement 5 fois avec 250 μl de détergent de travail par trou, avec un intervalle de 30 secondes entre chaque lavage.Utilisez du papier absorbant pour sécher
Ajouter à chaque puits la solution de substrat A (50 μl), suivie de la solution de substrat B (50 μl). Agiter pendant 5 secondes et bien mélanger. Colorer à 25 °C dans l'obscurité pendant 15 minutes.
Ajouter 50 μl de solution de finition à chaque puits, agiter doucement et bien mélanger pour terminer la réaction.
Mesurer la valeur d'absorption de chaque puits à 450 nm à l'aide d'un analyseur d'aflatoxines (double longueur d'onde 450/630 nm est recommandée).La mesure doit être terminée dans les 10 minutes suivant la fin de la réaction.
10 L'instrument termine la mesure et fournit automatiquement le résultat
Résultats expérimentaux
Après test, la teneur en aflatoxine de l'échantillon est d'environ 0,19ug/kg, ce qui répond à la norme GB 2761-2017 " Norme nationale de sécurité alimentaire pour les limites de toxines fongiques dans les aliments ".